Q1: 熒光素的純度對實驗有成影響嗎？

A：有影響。99%以上的純度較好。

Q2: 甲蟲熒光素和螢火蟲熒光素之間有區別嗎？

A：二者之間沒有區別。

Q3: 如何溶解熒光素，其溶液穩定嗎？

A：熒光素鉀鹽在水中的溶解度為60 mg/ml，熒光素鈉鹽溶解度為100 mg/ml。熒光素游離酸是不溶于水的，但是在甲醇中的溶解度為10 mg/ml，在DMSO中溶解度為50 mg/ml。

熒光素鈉鹽和鉀鹽的水溶液短期內存放于-80℃，對實驗效果沒有明顯影響。有實驗證明，將熒光素溶解于脫氧中的水中會geng穩定些。

對于一些較為敏感的試驗，為了控制試驗中的可變因素，較推薦新鮮配置的反應液 。例如，低濃度的熒光素酶或者并非zui適的反應條件是需要高質量的底物才能進行反應 。

Q4: 熒光素鈉鹽和熒光素鉀鹽有什么區別？

A：目前的研究沒有發現二者在使用效果上的區別，僅在物理特征上有些小的差別，如熒光素鈉鹽溶解度會高于熒光素鉀鹽。但是在體內實驗研究中，有geng多的研究者傾向于選擇熒光素鉀鹽，據不完全統計，選用鉀鹽的使用人是鈉鹽使用人的3倍。

Q5: 熒光素鈉鹽，熒光素鉀鹽，和熒光素游離酸之間有什么區別？

A：游離酸不溶于水，在甲醇中的溶解度為10 mg/ml，在DMSO中溶解度為50 mg/ml，同樣可用NaOH，KOH弱堿去調節溶液的PH值。熒光素的鈉鹽或者鉀鹽在使用過程中會geng方便，尤其是在體內成像實驗中，因其能夠溶解在水中，反應毒性也會geng小些。

Q6: 為什么溶解熒光素鈉鹽或者鉀鹽的時候需用不含Ca2+或?Mg2+離子的PBS，有無別的鹽溶液可用來溶解熒光素？

A：PBS，或者其他的磷酸鹽緩沖液，或DPBS，常用來進行生物學研究或者細胞相關研究。PBS/DPBS為等滲溶液，PH為7.2-7.6之間。DPBS和PBS之間無差別，只是通常情況下，DPBS是不含鈣鎂離子。鈣鎂離子可能會抑制某些蛋白酶的活性。此外Mg2+是催化熒光氧化的重要因素，Ca2+是和腔腸素氧化有關的離子。其他的鹽溶液也可用來溶解熒光素，但要避免溶液中的陽離對實驗造成影響。

Q7: 熒光素酶的發光特性？

A：熒光素腹腔注射老鼠后約1 min后，能夠表達熒光素酶的細胞開始發光，10 min后強度達到穩定的zui高點，在zui高點持續約20-30 min后開始衰減，約3 h后熒光素排除，發光全部消失，zui好的檢測時間是在注射后15-35 min內。其動力學曲線如下圖：