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人源血清學檢測二抗怎么選？
發布時間：2020-06-11瀏覽次數：1239返回列表
血清學檢測是許多健康問題診斷過程中的關鍵檢測方法，包括器官移植篩查，交叉匹配，疾病診斷，監測等。這些檢測在臨床決策中起著至關重要的作用，免疫分析是目前可用的zui強大，zui靈敏的血清學檢測方法之一，它基于抗原抗體之間的高度特異性結合，即使在低濃度下也能進行定性和定量檢測。有多種免疫測定方法，以下是其中zui常見兩種檢測方法示意圖，分別是夾心法（圖1A）和直接法（圖1B），當選擇用于夾心法檢測的抗人二抗時（圖1A），需要考慮一抗的種屬，并使用與該物種有zui小交叉反應的二抗。
圖1：測定方式：A.夾心法，B.直接法
免疫分析在多種疾病診斷起重要作用
各類免疫測定技術各有優缺點，例如，快速測定法（如膠體金側向流動法）可在數min 內提供定性結果，可進行即時檢測，而ELISA可能需要花費數小時才能完成，但可提供定量數據。
而當前嚴重急性呼吸系統綜合癥冠狀病毒2（SARS-CoV-2）大流行geng加凸顯了側向流動分析的，由于該疾病具有快速傳播和較高的死亡率等特征，美國FDA已采取相關措施，允許各州未經FDA批準就可開展新的SARS-CoV-2檢測。該修訂允許使用快速檢測試劑盒，該試劑盒定性檢測患者針對SARS-CoV-2產生的IgG和IgM抗體，從而顯著加大了SARS-CoV-2的檢測能力，盡可能地減少病毒的傳播。盡管側向流動檢測具有明顯的，但這種分析方法無法提供定量的數據。
表1.幾種類型的免疫測定法的優缺點，檢測過程，檢測的Ig類型
| 免疫測定方法 | 檢測過程 | 可檢測免疫球蛋白亞型 |
| 快速測試/橫向流動（膠體金） | 膠體金層析試紙條主要由4個部分組成：在樣品區滴加樣品后，借助毛細作用，樣品泳動至玻璃纖維膜，金標復合物溶解，并與樣品進行抗原抗體反應，形成復合物，繼續泳動至硝酸纖維素膜的檢測區，帶有金標記的復合物被檢測區抗原或抗體捕獲，呈現條帶。而質控線不管有無目的樣本，都會與金標抗體進行結合并顯色，相當于我們的陽性對照，證明金標抗體是正常的。 | IgG，IgM |
| 流式細胞 | 將血清樣品添加到帶有抗原的細胞或磁珠中，樣本中的人源抗體會捕獲抗原，再加入熒光探針偶聯的二抗（圖1B），然后可以通過流式細胞儀分析熒光以給出定量數據。 | IgG，IgM，IgA |
| 流動注射分析（FIA） | 與流式細胞術相似，將樣品注射到含有固定抗原的柱子中，樣品中的人源抗體會與抗原結合（圖1B），再加入熒光探針或酶偶聯抗人的二抗進行檢測，用比色或熒光法進行檢測。 | IgG，IgM，IgA |
| ELISA法 | 將一抗固定在固體介質表面上，通常是微孔板，隨后會捕獲抗原（圖1A）或將抗原直接包被在板上（圖1B），與來自血清的人源抗體結合，加入酶標記的抗人二抗，zui后，添加酶底物，從而得到與分析物濃度成正比的比色讀數。 | IgG，IgM，IgA |
| 聚合酶鏈反應（PCR） | 該過程類似于ELISA，但是第二抗體是與寡核苷酸綴合。然后通過實時PCR進行DNA擴增和檢測。 | IgG，IgM，IgA |
抗人二抗是各類免疫分析中的關鍵試劑
盡管免疫測定的功能和目的有所不同，但為了在臨床上獲得準確，可靠數據，開發血清學試劑盒時，高質量試劑至關重要。抗人二抗的質量是開發免疫測定試劑盒時的關鍵考慮因素，二抗需要謹慎選擇，因為它們會結合一種一抗的多個表位上，從而增強了信號的靈敏度和選擇性。表2總結了在進行免疫測定選擇合適的二抗時需要考慮的多個方面。
表2.在免疫分析中選擇合適的二抗時的考慮因素以及我們抗體的特征
