elisa常規(guī)指標(biāo)實驗常見問題——白介素

  elisa試劑盒在實際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴格按照操作步驟進行操作，同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評，以嚴謹?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本，才能保證檢測質(zhì)量。現(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀，這對于實現(xiàn)elisa標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。

  白介素elisa試劑盒以靈敏度較高、特異性較好的特點在上得到了廣泛的應(yīng)用，但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。我將操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給同行帶來一些啟發(fā)，提高試驗質(zhì)量。下面，分析白介素elisa試劑盒試驗操作中的一些常見問題：

  一、選擇試劑

  選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑，嚴格按照試劑說明書進行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。

  二、加樣

  可能原因：

  1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進行加樣;

  2)手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時);

  3)加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。

  解決辦法：

  1) 標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。

  2) 加樣后及時放入孵箱。

  3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。

  4) 如果采用AT或其他全自動加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。

  5) 標(biāo)本較多時，請分批操作。

  三、 孵育

  可能原因：

  1) 孵育時未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗*;

  2) 孵育時間人為延長，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗*。

  解決辦法：

  1) 貼封片或加蓋;

  2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。

  四、洗板

  ELISA試劑盒可能原因：

  1) 采用手工洗板，孔與孔之間液體交叉。

  2) 采用半自動洗板機洗板時，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞，抽吸不*;洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。

  3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。

  解決辦法：

  1) 保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干。

  2) 合理安排，或多用幾臺洗板機。

  五、顯色

  可能原因：

  1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;

  2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。

  解決辦法：

  1) 顯色劑盡量在臨用前配制，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用。

  2) 加樣時保持顯色劑不外流。

  3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。

  六、終止

  可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。

  七、讀板

  如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。所以在整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化，有效提高檢測質(zhì)量。

  白介素試劑盒上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠銷多個國家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準(zhǔn)則、以市場需求為導(dǎo)向，不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量"的方針。