人結(jié)合珠蛋白(HAP)酶聯(lián)免疫分析檢測試劑盒

  本試劑盒僅供研究使用。

  檢測范圍： 96T

  10μg/ml -400μg/ml

  使用目的：

  本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中結(jié)合珠蛋白(HAP)含量。

  實(shí)驗(yàn)原理

  本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人結(jié)合珠蛋白(HAP)水平。用純化的人結(jié)合珠蛋白(HAP)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入結(jié)合珠蛋白(HAP)，再與HRP標(biāo)記的結(jié)合珠蛋白(HAP)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的結(jié)合珠蛋白(HAP)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人結(jié)合珠蛋白(HAP)濃度。

  ELISA試劑盒組成：

  試劑盒組成48 孔配置96 孔配置保存

  說明書1 份1 份

  封板膜2 片(48)2 片(96)

  密封袋1 個(gè)1 個(gè)

  酶標(biāo)包被板1×481×962-8℃保存

  標(biāo)準(zhǔn)品：540μg/L0.5ml×1 瓶0.5ml×1 瓶2-8℃保存

  標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1 瓶1.5ml×1 瓶2-8℃保存

  酶標(biāo)試劑3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存

  樣品稀釋液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存

  顯色劑 A 液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存

  顯色劑 B 液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存

  終止液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存

  濃縮洗滌液(20ml×20 倍)×1 瓶(20ml×30 倍)×1 瓶2-8℃保存

  2. 加樣：分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

  3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

  4. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

  5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

  6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

  7. 溫育：操作同3。

  8. 洗滌：操作同5。

  9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

  10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

  11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

  操作程序總結(jié)：

  計(jì)算

  以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。

  注意事項(xiàng)

  1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

  2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

  3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

  4. 請(qǐng)每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值)，請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

  5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

  6.底物請(qǐng)避光保存。

  7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

  8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

  9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

  10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)。

  保存條件及有效期

  1.試劑盒保存：;2-8℃。

  2.有效期：6個(gè)月