ELISA實驗的基質效應及常見問題解析

  在ELISA實驗中，偶爾會遇到樣品濃度挨近試劑盒的靈敏度就容易發生樣本OD450值低于空白值的現象，特別是在血清和血漿樣本中。這就有可能是基質效應導致的結果。

  那什么是基質效應呢?

  基質效應：

  分析中，基質指的是樣本中被分析物以外的組分，基質常常對分析物的分析進程有顯著的煩擾，并影響分析成果的準確性，這些影響和煩擾被稱為基質效應。

  仿照物與被測樣本在蛋白豐度、復雜性、pH等要素都會存在差異。當單個樣本或少量樣本值低于空白值時，可能是過錯要素，這時應增加重復，進步操作技術。當許多樣本都低于空白值時，應思考基質效應的影響，建立校正曲線予以修改。

  ELISA試劑盒在開發進程中，標準品不能選用人或動物血清、血漿作為標準曲線的稀釋液，只能選用其仿照物。當樣本的基質與其仿照物對比，下降抗原抗體的聯絡，便產生了樣本值低于空白值的現象。構成樣本值無法計算出數值，或許數值為負。

  如今常用的去掉基質效應的方法是，經過已知分析物濃度的標準樣品，一同盡可能堅持樣本中的基質不變，建立一個校正曲線。

  講到了這里，那我們要如何去判斷是否是基質效應呢?

  當單個樣本或少量樣本值低于空白值時，可能是實驗操作出現問題，這時應增加重復，進步操作技術。當許多樣本都低于空白值時，應思考基質效應的影響，建立校正曲線予以修改。基質效應的原因錯綜復雜，有可能是樣品中存在的基質導致原抗體的聯絡結合能力下降，便產生了樣本值低于空白值的現象。導致樣本值無法計算出數值，或許數值為負。雖然原因復雜，但有方法可以用來評估基質效應。

  01種：線性稀釋

  一般來講，抗原和捕獲抗體、檢測抗體之間的結合作用很強，樣品濃度被稀釋并不影響它們的結合，而造成基質效應的非特異結合的力要弱很多，如果不斷稀釋樣品，非特異結合造成的干擾會逐步減少，測量值也接近真實值。沒有基質效應時，無論如何稀釋，測量值都和真實值吻合。而有基質效應時，稀釋會造成非特異性結合比例的減少，測量值也相應地產生很大改變。

  02 第2種：摻入回收率實驗

  將低、中和高濃度的分析物摻入到已測定過濃度的樣本中，摻入前后實測到的濃度增加部分與摻入濃度之比就是回收率，回收率以百分比的形式呈現。回收率介于80-120%，才符合標準。

  如何避免基質效應：

  基質效應可以通過產品研發階段的優化盡可能去消除的。澤葉生物針對ELISA產品研發進行了多種優化。ELISA試劑盒在開發進程中，標準品不選用人或動物血清、血漿作為標準曲線的稀釋液，只能選用其仿照物。我們量身定制的緩沖液系統，這些優化后的緩沖液體系能很好消除基質效應。還有當檢測某個分析物時，其他相關因子或類似結構因子如果有非特異性結合，也會導致基質效應，我們也因此做了大量的交叉反應，確保沒有明顯的交叉反應和干擾。而且我們試劑盒必須通過嚴格的基質效應測試，全部包括線性稀釋和摻入回收率實驗，并把測試結果記錄在說明書中。

  ELISA試劑盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區。是一家專門從事生物技術相關產品，勵志研發和銷售的綜合性生物公司，產品遠銷多個國家和地區，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導向，不斷開發高質量的新產品，提供客戶滿意的綜合服務質量"的方針。研發和銷售的綜合性生物公司，產品遠銷多個國家和地區，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導向，不斷開發高質量的新產品，提供客戶滿意的綜合服務質量"的方針。