人白細胞介素1(IL-1)酶聯免疫檢測試劑盒使用說明書

  使用前仔細閱讀本說明書。本酶聯免疫試劑盒是基于雙抗體夾心技術原理，來檢測人白細胞介素1(IL-1)，只能用于研究用途，不得用于醫學診斷。

  用 途：用于人血清、血漿及相關液體樣本中白細胞介素1(IL-1)的測定。

  工作原理

  本試劑盒采用的是生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法(ELISA)測定樣品中人白細胞介素1(IL-1)水平。向預先包被了人白細胞介素1(IL-1)單克隆抗體的酶標孔中加入白細胞介素1(IL-1)，溫育;溫育后，加入生物素標記的抗IL-1抗體。再與鏈霉親和素-HRP結合，形成免疫復合物，再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶，然后加入底物A、B，產生藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的。顏色的深淺與樣品中人白細胞介素1(IL-1)的濃度呈正相關。

  試劑盒組成

  試劑盒組成 48孔配置 96孔配置 保存

  說明書 1份 1份

  封板膜 2片(48) 2片(96)

  密封袋 1個 1個

  酶標包被板 1×48 1×96 2-8℃保存

  標準品：320ng/L 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存

  標準品稀釋液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶 2-8℃保存

  鏈霉親和素-HRP 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存

  生物素標記的抗IL-1抗體 0.5ml×1瓶 1 ml×1瓶 2-8℃保存

  顯色劑A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存

  顯色劑B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存

  終止液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存

  濃縮洗滌液 (20ml×20倍)×1瓶 (20ml×30倍)×1瓶 2-8℃保存

  需要而未提供的試劑和器材

  1. 37℃恒溫箱。

  2. 標準規格酶標儀。

  3. 移液器及一次性吸頭

  4. 蒸餾水，

  5. 一次性試管

  6. 吸水紙

  注意事項

  1. 從2-8℃取出的試劑盒，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

  2. 各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差

  3. 嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

  4. 為避免交叉污染，要避免重復使用手中的吸頭和封板膜。

  5. 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。

  6. 底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。

  洗板方法

  手工洗板方法：甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次;將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內，浸泡1-2分鐘。根據需要，重復此過程數次。

  自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中

  標本要求

  1.不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

  2.標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。

  操作程序

  1. 標準品的稀釋：(本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。)

  160 ng/L 5號標準品 120μl的原倍標準品加入120μl標準品稀釋液

  80 ng/L 4號標準品 120μl的5號標準品加入120μl標準品稀釋液

  40 ng/L 3號標準品 120μl的4號標準品加入120μl標準品稀釋液

  20 ng/L 2號標準品 120μl的3號標準品加入120μl標準品稀釋液

  10 ng/L 1號標準品 120μl的2號標準品加入120μl標準品稀釋液

  2. 根據代測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的盡量做復孔。

  3. 加樣：1)空白孔，空白對照孔不加樣品，生物素標記的抗IL-1抗體，鏈霉親和素-HRP，只加顯色劑A&B和終止液，其余各步操作相同;2)標準品孔：加入標準品50ul，鏈霉親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體，故不加);3)代測樣品孔：加入樣本40ul，然后各加入抗IL-1抗體10ul、鏈霉親和素-HRP50ul，蓋上封板膜，輕輕震蕩混勻，37℃溫育60分鐘。

  4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

  5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

  6. 顯色：每孔先加入顯色劑A50ul，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.

  7. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(此時藍色立轉)。

  8. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后10分鐘以內進行。

  9. 根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據樣品的OD值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。也可以使用各種應用軟件來計算。

  操作程序總結：

  1、準備試劑，樣品和標準品

  2、加入準備好的樣品和標準品，生物素標記的二抗和酶標試劑，37℃反應60分鐘

  3、洗板5次，加入顯色液A、B，37℃顯色15分鐘

  4、加入終止液

  5、15分鐘內讀OD值

  6、計算

  檢測范圍：5 ng/L→160 ng/L。

  規格：96T/盒

  保存：2-8℃。

  有效期：6個月(2-8℃)。

  人白細胞介素1(IL-1)酶聯免疫檢測試劑盒使用說明書

  人白細胞介素1(IL-1)酶聯免疫檢測試劑盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區。是一家專門從事生物技術相關產品，勵志研發和銷售的綜合性生物公司，產品遠銷多個國家和地區，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導向，不斷開發高質量的新產品，提供客戶滿意的綜合服務質量"的方針。研發和銷售的綜合性生物公司，產品遠銷多個國家和地區，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導向，不斷開發高質量的新產品，提供客戶滿意的綜合服務質量"的方針。