小鼠游離脂肪酸(FFA)酶聯免疫分析試劑盒使用說明書

  本試劑盒僅供研究使用。

  檢測范圍： 96T

  30μmol/L -800μmol/L

  使用目的：

  本試劑盒用于測定小鼠血清、血漿及相關液體樣本中游離脂肪酸(FFA)含量。

  實驗原理

  本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠游離脂肪酸(FFA)水平。用純化的小鼠游離脂肪酸(FFA)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入游離脂肪酸(FFA)，再與HRP標記的游離脂肪酸(FFA)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的游離脂肪酸(FFA)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，通過標準曲線計算樣品中小鼠游離脂肪酸(FFA)濃度。

  試劑盒組成

  130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶

  2酶標試劑6ml×1瓶8標準品(1600μmol/L)0.5ml×1瓶

  3酶標包被板12孔×8條9標準品稀釋液1.5ml×1瓶

  4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份

  5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張

  6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個

  標本要求

  1.標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

  2.不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

  操作步驟

  標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

  800μmol/L5號標準品150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

  400μmol/L4號標準品150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液

  200μmol/L3號標準品150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液

  100μmol/L2號標準品150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液

  50μmol/L1號標準品150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

  加樣：分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

  溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

  配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

  洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

  加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

  溫育：操作同3。

  洗滌：操作同5。

  顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

  終止：每孔加終止液50μl，終止反應(此時藍色立轉黃色)。

  測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

  操作程序總結：

  計算

  以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。

  注意事項

  1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

  2.濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

  3.各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

  請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5)。

  封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

  6.底物請避光保存。

  7.嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

  8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

  9.本試劑不同批號組分不得混用。

  10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。

  保存條件及有效期

  1.試劑盒保存：;2-8℃。

  2.有效期：6個月

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