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生化試劑在實(shí)驗(yàn)中的常識

發(fā)布時間:2019-03-14瀏覽次數(shù):1335返回列表

一、在重蒸酚中加入0.1%的8-羥基喹啉及少量巰基乙醇
保存在冰箱中的酚,容易被空氣氧化而變成粉紅色,這樣的酚容易降解DNA,一般不可以使用。為了防止酚的氧化,可加入0.1%的8-羥基喹啉及少量巰基乙醇。8-羥基喹啉是帶有淡黃色的固體粉沫,不僅能抗氧化,并在一定程度上能抑制DNase的活性。
二、提細(xì)胞基因組DNA時,通常要異戊醇可以降低表面張力,從而減少氣泡產(chǎn)生。另外,異戊醇有助于分相,使離心后的上層含DNA的水相、中間的變性蛋白相及下層有機(jī)溶劑相維持穩(wěn)定。
三、DNA通常保存在采用TE緩沖液,Tris-HCl的緩沖系統(tǒng),加入EDTA可以螯合二價金屬離子進(jìn)而抑制依賴于二價金屬離子的DNA酶的活性,對DNA起到保護(hù)作用。
四、蛋白印跡中封閉液的作用:封閉液的作用是封閉未吸附蛋白的部位,以減少非特異性結(jié)合背景的影響。常用的封閉液有脫脂奶粉、小牛血清等。
五、簡單的克隆載體必需包括: 復(fù)制起點(diǎn);選擇標(biāo)記:主要是抗性基因;多克隆位點(diǎn):便于外源DNA的插入。
六、用酚抽提細(xì)胞DNA時的作用: 使蛋白質(zhì)變性。
七、使用離心機(jī)應(yīng)注意事項(xiàng) 先應(yīng)該根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)需求選擇合適的離心機(jī)和轉(zhuǎn)子以及離心管,使用離心機(jī)時的工作轉(zhuǎn)速不應(yīng)該超過離心機(jī)、轉(zhuǎn)子以及離心管的zui大允許轉(zhuǎn)速。離心前注意嚴(yán)格 平衡樣品。安裝轉(zhuǎn)子和轉(zhuǎn)子蓋要規(guī)范、準(zhǔn)確。離心時要留人看守,發(fā)現(xiàn)離心機(jī)異常應(yīng)立即關(guān)閉離心機(jī)。離心結(jié)束后要安放好轉(zhuǎn)子。
八、分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室常用的滅菌方法有:高壓蒸汽滅菌、干熱滅菌、化學(xué)藥劑消毒、過濾除菌
九、在分離DNA過程中,造成DNA分子斷裂的因素有: 核酸酶降解;化學(xué)降解;物理剪切。
十、在酶切反應(yīng)緩沖液中加入BSA提高溶液中蛋白質(zhì)的濃度,對酶起保護(hù)作用。

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