雙縮脲法蛋白質含量測定試劑盒說明書
產品簡介:
樣品可溶性蛋白質含量常常用于酶活性計算。此外，可溶性蛋白質含量也用于食品等質量分析。強堿性溶液中，雙縮脲與CuSO4形成紫色絡合物；紫色絡合物顏色的深淺與蛋白質濃度成正比，而與蛋白質分子量及氨基酸成分無關，故可用來測定蛋白質含量。該方法測定范圍為1~10mg蛋白質，適用于蛋白質濃度高的樣品，尤其是動物材料。

自備儀器和用品:
可見分光光度計、移液器、1 mL玻璃比色皿和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體×1瓶，4℃保存。
標準品：液體×1瓶，5 mg/mL，4℃保存。
樣品中可溶性蛋白質提取:
1. 液體樣品：澄清無色液體樣品可以直接測定。
2. 組織樣品：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液（自備，根據需要選用酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水））冰浴勻漿，10000rpm，4℃離心10min，取上清，即待測液。（動物樣品常常需要稀釋）
3. 細菌、真菌：按照細胞數量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后10000rpm，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。

測定步驟:
1. 分光光度計預熱30 min以上，調節波長到540 nm，蒸餾水調零。
2. 空白管：取1 mL玻璃比色皿，加入200μL蒸餾水，1000μL試劑一，混勻后室溫靜置15 min，于540nm比色，記為A空白管。
3. 標準管：取1 mL玻璃比色皿，加入200μL標準液，1000μL試劑一，混勻后室溫靜置15 min，于540 nm比色，記為A標準管。
4. 測定管：取1 mL玻璃比色皿，加入200μL待測液，1000μL試劑一，混勻后室溫靜置15 min，于540nm比色，記為A測定管。
樣品中蛋白質濃度計算：
C待測（mg/mL）= C標準管×(A測定管－A空白管)÷(A標準管－A空白管)
=5×(A測定管－A空白管)÷(A標準管－A空白管)

注意事項：
1. 樣品蛋白濃度須在1~10mg/ml范圍內，低于1mg/ml不能用此法，高于10mg/ml須做相應稀釋。因此測定前用1~2個樣做預實驗，確保蛋白濃度在1~10mg/ml范圍內。
2. 待測樣品蛋白提取可用生理鹽水、雙蒸水或不含蛋白的PBS提取。該法受硫酸銨、Tris緩沖液干擾，提取液中應不含這些物質；否則改用BCA蛋白質含量測定試劑盒。
溫馨提示：不可用于臨床治療。
主要用于科研試驗研究，可在線咨詢訂購。
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